qPCR效率计算器 qPCR效率计算器 计算器
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更新时间：2025.09.25
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qPCR效率计算器通过标准曲线斜率计算PCR效率，目标效率为90-100%。低于90%或超过110%需优化。提供稀释曲线布局示例及优化建议。

qPCR效率计算器验证工具

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async function calculatorQpcrEfficiency() {
    
    
    let url = 'https://openapi.explinks.com/您的username/v1/calculator_qpcr_efficiency/saf202509256989241dc627';
    
    const options = {
        method: 'POST',
        headers: {
            'Content-Type': 'application/json',
            'x-mce-signature': 'AppCode/{您的Apikey}'
            // AppCode是常量,不用修改； Apikey在‘控制台 -->API KEYs --> 选择’API应用场景‘，复制API key
        },
        body: {"slope":0}
    };
    
    try {
        const response = await fetch(url, options);
        const data = await response.json();
        
        console.log('状态码:', response.status);
        console.log('响应数据:', data);
        
        return data;
    } catch (error) {
        console.error('请求失败:', error);
        throw error;
    }
}

// 使用示例
calculatorQpcrEfficiency()
    .then(result => console.log('成功:', result))
    .catch(error => console.error('错误:', error));

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qPCR效率计算器

使用此qPCR效率计算器从标准曲线的斜率确定PCR检测的效率。为了验证您的PCR运行效率，您应该获得90-100%的可接受qPCR效率，这意味着目标序列中的分子数量在每个复制循环中翻倍。

继续阅读以了解如何计算引物效率，如何正确解释qPCR效率结果，并找到改善PCR结果的技巧。您还将找到DNA稀释的板布局示例表，以达到更好的扩增率。如果术语已经让您感到困惑，最好先查看我们的退火温度计算器，以更好地理解PCR的基础知识。

🧮

什么是qPCR效率？

PCR效率以百分比(%)表示，告诉我们PCR（聚合酶链反应）检测的表现如何。它查看目标序列的倍增比率。如果qPCR（定量PCR）引物效率等于100%，这意味着我们的目标序列在每个PCR循环中翻倍，聚合酶酶和引物以最大容量工作；这是我们的目标。

我们计算PCR效率来确定我们检测的可靠性和准确性，并将不同检测相互比较。通常，运行带有稀释系列的标准曲线实验。将得到的Ct（循环阈值）值与核酸输入水平的对数作图，生成线性图。我们使用此图的斜率或梯度来确定PCR反应效率。

效率<90%或≥110%是不可接受的，表明需要进一步的检测优化。让我们接下来看看qPCR效率计算器的使用、方程式以及如何正确解释结果！

📝

如何计算qPCR效率 — 公式

要计算PCR效率，我们只需要知道一个值：标准曲线的斜率。要获得此值，运行稀释曲线并查看所得曲线的斜率。此时，您可以近似PCR效率：如果斜率的值≈-3.3，您的PCR以大约100%的效率运行，斜率-3.322正好等于100%（-1/log(2)）。

效率(%) = (-1 + 10^(-1/斜率)) × 100
扩增因子 = 10^(-1/斜率)

此方程的结果是以百分比表示的效率。如果您达到100%的值——完美，您的PCR以完全效率运行。记住只有90%和110%之间的值是可接受的！

🌰

如何使用qPCR效率计算器 — 示例

qPCR效率计算器假设在您的标准曲线图上，DNA拷贝数的对数绘制在x轴上，Ct绘制在y轴上。首先，验证您的图表看起来像这样！之后，您可以按照以下简单步骤：

计算过程：

1. 找出您的标准稀释曲线的斜率；让我们以-3.35的值为例。

2. 将斜率值插入计算器的第一个字段。

3. 这就是您需要做的全部！计算器将确定qPCR引物效率百分比以及扩增因子：

效率 = -1 + 10^(-1/-3.35) = 98.84%

扩增因子 = 10^(-1/-3.35) = 1.99

扩增因子的最大值可以是2，因为DNA有两条链，最多目标序列可以在每个循环中翻倍。

🌍

如何优化PCR效率和稀释曲线

在这里找到一些关于如何改善标准曲线和PCR效率的额外建议！我们还将为您提供在标准曲线PCR运行的孔板上移液DNA稀释的模板。首先，确保您遵循所使用PCR试剂盒和反应物的提供指南！

优化建议：

  • 使用至少5个稀释点，进行10倍稀释
  • 每个稀释点至少运行三重复
  • 如果标准曲线中有1个或更多异常值，重复曲线
  • 运行后检查R²和异常值
  • 使用四眼原则——让多人首次执行标准曲线
  • 仅使用纯模板DNA（避免污染）并保持工作空间清洁和消毒
  • 确保移液器正确校准，材料适当且为标准材料
  • 调整引物和探针浓度；用荧光DNA结合染料验证特异性

有各种方法验证上述要点。始终仔细调查异常结果并考虑故障的不同原因。尝试一次只改变一个或几个参数，以精确确定最初导致错误的原因。

📚

重要概念解释

Ct值是什么？ 它是荧光信号超过背景水平所需的PCR循环数。Ct水平与样品中目标核酸的量成反比（即，Ct水平越低，样品中目标核酸的量越大）。

确定PCR效率的最薄弱环节是稀释曲线的制备，这会导致错误的效率计算。我们的系列稀释计算器只是Omni计算器的稀释计算器之一，可以帮助您制作正确的溶液。

NTC代表什么？ NTC代表无模板对照或阴性对照，通常是无菌水，用于检测qPCR检测中的潜在污染或非特异性扩增。

样品制备、移液稀释和等待机器人完成可能是单调的任务，有很长的等待期。我们的播客计算器可以帮助您更有效地度过这段时间。

❓

常见问题

如何计算qPCR的扩增效率？

运行带有稀释的标准曲线PCR并记录所得曲线的斜率，例如-3.35。使用qPCR效率公式并插入您的斜率值：效率 = -1 + 10^(-1/-3.35) = 98.84%。解释您的结果：正好-3.322的斜率意味着100% PCR效率，而90%和110%之间的结果是可接受的。

如何改善qPCR效率？

改善qPCR效率结果的一些最关键参数是：对于标准曲线，使用≥5个稀释点并为每个至少运行三重复；如果有异常值则重复检测；在所有过程步骤中使用四眼原则；仅使用未污染的模板DNA并保持清洁的工作空间；使用正确校准的移液器；调整引物和探针浓度；用荧光DNA结合染料验证特异性。

什么是好的PCR效率？

完美的PCR效率表示为100%（等于标准曲线斜率-3.322），意味着所有目标DNA在每个PCR循环中翻倍。90%和100%之间的结果（-3.6 ≥ 斜率 ≥ -3.3）是可接受的。超出此范围的结果表明PCR需要进一步改进。

qPCR效率如何能大于100%？

可能导致理论PCR效率大于100%的因素包括抑制剂、污染、移液器的精度误差、错误的稀释点，或当值处于反应的非线性阶段时。调整PCR检测时，一次只改变一个或几个参数，以精确确定最初导致错误的原因。

API接口列表
qPCR效率计算器
qPCR效率计算器
1.1 简要描述
qPCR效率计算器
1.2 请求URL
/[[username]]/v1/calculator_qpcr_efficiency/[[function-no]]
1.3 请求方式
POST
1.4 入参
参数名 参数类型 默认值 是否必传 描述
slope number -3.35 否 qPCR标准稀释曲线的斜率值，通常为负值，理想值约为-3.322
1.5 出参
参数名 参数类型 默认值 描述
efficiency number PCR扩增效率，以百分比表示，理想值为100%，可接受范围为90%-110%
qualityAssessment string 基于效率值的质量评估结果：优秀(90-110%)、需要优化(<90%或>110%)
amplificationFactor number 每个PCR循环的扩增倍数，理想值为2.0，表示目标序列完全倍增
recommendation string 基于计算结果给出的实验改进建议
1.6 错误码
错误码 错误信息 描述
FP00000 成功
FP03333 失败
1.7 示例 
参考上方对接示例